大鼠原代股動脈平滑肌細胞專用培養(yǎng)基

注意事項

僅限科研用。

培養(yǎng)體系中的一些組分是對人體健康有害的物質(zhì)，請不要用暴露的皮膚接觸培養(yǎng)體系的液體和有培養(yǎng)體系的液體殘留的容器內(nèi)部；這部分有害物質(zhì)的濃度和危害性都較低，如有接觸，立即用自來水沖洗即可。

復蘇

1) 將恒溫水浴鍋中的水預(yù)熱到 37℃；

2) 準備一支 15ml 離心管，加入 5ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基，放入 37℃水浴鍋中預(yù)熱；

3) 戴上護目鏡，厚毛線手套后，從液氮罐中取出要復蘇的細胞，盡快轉(zhuǎn)入 37℃恒溫水浴鍋中

復溫晃動凍存管以提高復溫速率；

4) 將融化了的凍存管中的細胞吸入事先準備的離心管中，混勻后，1000rpm 離心 5min；

5) 準備一個 T-25 培養(yǎng)瓶，寫上細胞名稱、日期，再加入 4ml 培養(yǎng)基；

6) 離心完成后棄去上清，用 1ml 培養(yǎng)基重懸細胞后，轉(zhuǎn)入 T-25 細胞培養(yǎng)中，混勻后轉(zhuǎn)入

CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)靜置。

傳代 （細胞傳代建議一傳二）

1) 當細胞匯合度達到 85%以上時，可進行傳代。

2) 在生物安全柜內(nèi)，打開培養(yǎng)瓶瓶口，收集瓶內(nèi)的培養(yǎng)基；

3) 向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入 3ml 無菌的 1×PBS 后，水平放置培養(yǎng)瓶，使PBS 能夠浸潤到培養(yǎng)瓶底面上所有的面積，吸棄 PBS；

4) 向瓶內(nèi)加入消化液 1ml，浸潤底面后放入 37℃ CO2培養(yǎng)箱中孵育 1~2min；

5) 孵育完成后在倒置顯微鏡下觀察細胞是否變圓飄起，若全部消化下來則直接向培養(yǎng)瓶內(nèi)加入2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基中，將懸液吸入 15ml 離心管；

① 準備一個無菌的 15ml 離心管，加入 2ml 含 10%FBS 的培養(yǎng)基；

② 將消化下來的細胞吸入①中的離心管內(nèi)中和（避免吹打③）；向之前消化的培養(yǎng)瓶中加入 1ml 繼續(xù)消化 2min 左右，輕拍培養(yǎng)瓶，95%左右細胞脫。

6) 1000rpm 離心 5min；

7) 準備兩個新的 T-25 培養(yǎng)瓶，各加入 4ml培養(yǎng)基。

8) 離心完成后，棄上清，用 2ml 培養(yǎng)基重懸離心細胞，將重懸后的細胞轉(zhuǎn)入 2 個 T-25 培養(yǎng)瓶，每個培養(yǎng)瓶各 1ml；

9) 水平放置培養(yǎng)瓶，震蕩混勻后，將培養(yǎng)瓶置于 37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。 

凍存 （細胞凍存建議每瓶 T25 凍一支）

1）~6）參照傳代步驟

7）離心完成后，棄上清，用 1mL 凍存液重懸細胞沉淀，然后轉(zhuǎn)入 1.8ml 凍存管中；

8）將凍存管轉(zhuǎn)入填充滿異丙醇的程序降溫盒中，之后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中過夜降溫；

9）第二天，取出降溫完成的序降溫盒中的凍存管，盡快轉(zhuǎn)入液氮罐中保存。

?無菌操作?：細胞培養(yǎng)需在無菌環(huán)境下進行，使用前需對超凈工作臺進行紫外線照射滅菌，定期清潔培養(yǎng)箱。實驗人員需更換工作服、鞋套，戴口罩、手套。

?器材滅菌?：玻璃器皿、金屬器械等可采用高壓蒸汽滅菌，塑料制品則多選擇環(huán)氧乙烷滅菌或購買已滅菌產(chǎn)品。

?試劑選擇?：所用培養(yǎng)液、血清、緩沖液等試劑應(yīng)無菌、無污染，使用前需進行無菌檢測。不同細胞對培養(yǎng)液成分要求有差異，應(yīng)按細胞類型選擇合適培養(yǎng)液。

?培養(yǎng)條件?：多數(shù)哺乳動物細胞適宜培養(yǎng)溫度為37℃，偏差應(yīng)控制在±0.5℃。培養(yǎng)箱應(yīng)保持良好密封性，定期檢查氣體濃度與流量，細胞培養(yǎng)通常需5%CO2以維持培養(yǎng)液pH值穩(wěn)定。培養(yǎng)箱內(nèi)濕度應(yīng)保持在95%左右。

?日常觀察?：每天在顯微鏡下觀察細胞形態(tài)、生長狀態(tài)與培養(yǎng)液顏色變化。

?定期檢測?：定期對細胞進行支原體、細菌、真菌等污染檢測。

Bcl2樣蛋白11(BCL2L11)重組蛋白 Recombinant Bcl2 Like Protein 11 (BCL2L11)

CCL8 Protein Human 重組人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 標簽)

HPGD重組小鼠 HPGD / 15-PGDH 蛋白 Protein

IL6ST Protein Rat 重組大鼠 gp130 / IL6ST / CD130 蛋白

TMED1重組人 TMED1 蛋白 (Fc 標簽) Protein

大鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白D(SP-D)試劑盒 ，英文名： SP-D ELISA Kit

Porcine keratinocyte growth factor (KGF) ELISA Kit 豬角化細胞生長因子(KGF)試劑盒

轉(zhuǎn)基因植物cry1A基因核酸試劑盒 48T

CLIAKitforMA/Melan-A(HumanMelanomaMarkerA)ELISAKit人黑色素瘤標記物

體液氧化應(yīng)激活性氧(ROS)高質(zhì)熒光測定試劑盒50次

ELISAKitPP裸鼠蛋酸酶

溴化乙錠   1g

EthidiumBromide(EB)   1ml(10mg/ml)

乙二醇   500ml

Ethyleneglycol

小鼠乙型肝e抗體(HBeAb)ELISA 試劑盒 96T/48T

Human soluble cluster of differeiation 38 (sCD38) ELISA Kit 人可溶性白細胞分化抗原38(sCD38)試劑盒

HumanHelicobacterpyloriIgM,Hp-IgMELISAKit 人幽門螺旋桿菌IgM(Hp-IgM)試劑盒 96T/48T 進口分裝

CLIAKitfor5-(Human5-Nucleotidase)ELISAKit人5核苷酸酶

飲料阿斯巴塘(aspaame)含量薄層色譜法定性試劑盒20次

MouseMacrophageInflammatoryProtein3α,MIP-3αELISAKit小鼠巨噬細胞性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)試劑盒規(guī)格：96T/48T

PE標記人CD80單克隆抗體

HLA Class II DR4抗體

大鼠原代股動脈平滑肌細胞專用培養(yǎng)基CHODL重組小鼠 CHODL / Chondrolectin 蛋白 Protein

Smad同源物7(Smad7)重組蛋白 Recombinant Mothers Against Decapentaplegic Homolog 7 (Smad7)

CNPY2重組人 CNPY2 蛋白 Protein

CCL8 Protein Human 重組人 CCL8 / MCP-2 蛋白 (SUMO 標簽)

NOV Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 / 恒河猴 CCN3 / NOV 蛋白